生物样品电镜实验取材及注意事项
一、生物样品透射电镜（TEM）超薄切片实验取材：
1、取材的准备工作：
所需器械均需4℃预冷（现有认为与实验室温度一致即可）：剪刀、镊子、双面刀片（用于切割、细修生物样品），放有2.5％～3％戊二醛固定液的EP小管若干（必须干净），冰盒一个，蜡板/塑料小板一张（放在冰盒上，滴上固定液，待切割组织时使用），牙签及吸管多根，生理盐水等。
2、取材：电镜生物样品的取材，尽量要求在活体情况下进行:
将动物麻醉，暴露待取脏器，在不中断血液供应的情况下用锋利剪刀剪下一小块目标组织，迅速放入洁净蜡板/塑料小板上预冷固定液小滴中，用新的双面刀片将组织修小（1mm3，或1x1x2mm3长条状），被镊子夹取过的部分修弃，用牙签将修好的组织小块轻轻挑入装有预冷戊二醛固定液的EP小管（事先贴好标签）内浸泡固定（注意：不可用力夹取），密封，置于4℃冰箱内保存。注：组织离开活体后，要求在0.5～2分钟内完成修块到浸入醛类固定液的操作过程。
如为肺组织，需用空针抽真空，或将所取肺组织充分震荡，使其完全沉到瓶底为止，或用小纱布包裹浸没，使组织能得到充分固定。
如果组织块带有较多血液或组织液，用滴管吸取缓冲液（0.1M PBS）或等渗生理盐水（0.9%NS）把血液和组织液冲掉，迅速放入蜡板/塑料小板上的固定液小滴中细修成小块→固定。
3、取材要点：
取材的原则要求：快、准、冷、小、轻。应避不同个体组织之间交叉污染。
1) 快：为了保持生物材料的活体状态，减少“死后”组织自溶等变化，组织从活体取下后最短时间内（争取在1分钟内）浸入预冷固定液中。
2) 小：组织块体积一般要求约1×1×1mm3立方小块或横切面约1 mm2、长约2～3mm的长条形（如皮肤、粘膜等），以利于固定液的穿透。对于某些特殊组织，可适当取大一点，先投入预冷的固定液中固定30分钟，待组织稍硬后，再取出修成小块，放入固定液中继续低温固定。
3) 冷：为了降低酶活性，防止细胞自溶，取材操作尽量保持在低温（4℃）条件下进行；组织块修切时要在冷固定液中进行；固定样品的固定液要提前预冷。
4) 轻：取材用器械应锋利，取材动作宜轻，避免牵拉、挫伤、挤压组织，防止组织受机械损伤。
5) 准：取材部位准确。肾脏、胰岛、脑等不同部位有不同组织结构，应根据研究目的和要求确定切取部位。
注意：
(1)对动物组织，最好在解剖前做灌注固定；对脑、脊髓、睾丸、眼球等取材耗时长、操作复杂的组织则必须进行灌注固定再取材，以最大限度保存细胞的微细结构。
(2)取材部位解剖水平的准确定位要求误差应 ≤ 1mm；各实验组和对照组应同时取材，保证取材区位及方位的一致性和代表性（如：高血压动物模型取心肌组织，一律取左心室同一部位）。否则，所得结果不真实可靠，最终导致整个实验的失败。
4、特殊样品取材：
韧带、皮肤、肌肉等有方向性组织：根据方向要求修成长条状（1x1x3 mm3）→固定。
肠道、气管等空腔性组织：应剖开腔面，用0.1M PBS或等渗生理盐水把血液、组织液冲掉，再修成长条状（1x1x2～3 mm3）→固定。
消化道黏膜、角膜、视网膜等活检薄膜组织：尽量展平在滴有固定液的干净腊板上，待其稍微硬化后再修成小块→固定。
血管：小动脉切成长约2mm短柱状即可；大动脉需剖开动脉，沿着纵轴切成长2mm、宽1mm 的长条形→固定。
脑组织：先进行灌注固定，根据实验目的切取相应部位，做定向包埋。研究神经轴索、髓鞘、神经胶质细胞，取脑组织白质部分；研究神经元或血脑屏障结构，取脑皮质灰质部分，以神经元长轴方向（脑组织矢状面）作为切面方向，以更好地观察神经元细胞核、轴突、树突结构变化，突触、毛细血管结构也较易见。
培养细胞：悬浮细胞直接离心成团后，沿离心管壁加入2.5%的戊二醛固定液固定，不要晃动。
细菌、病毒：取材基本同培养细胞方法。
植物材料的获取：叶片组织取1×3㎜长条；根、茎果实切取1mm3小块；表面有毛刺者先用酶处理，使之软化，表面有蜡质者先脱蜡，蒸馏水洗净后再取材固定。所有叶片组织均需抽真空，使样品沉入固定液中。
二、生物样品扫描电镜（SEM）实验取材：
生物样品SEM实验取材方法与TEM相似。由于SEM观察组织、细胞样品表面细微结构，取材过程中，应保护好组织拟观察表面的精细结构，做好对该面的识别和无损伤清洁。样品块大小可为3×3×5mm3。
注：1.为了取得良好的电镜结果，实验者必须严格按照电镜取材要求进行取材；取材之前复习与实验内容相关的组织学、解剖学及病理学基本知识，以保证所取组织的准确性及样品质量。
2.每一例标本切取3～4小块组织，使用电镜室提供的固定剂进行固定。
3.骨组织需先进行脱钙处理。因各实验人员送检骨组织仍有可能存在脱钙不全，导致超薄切片时钻石刀损
坏严重，故所有骨组织、较硬组织均不在本室接收的样品范围之内。
3.取好样品尽快送到电镜室，以尽早进入制备环节。
（审核：一审张睿，二审何志全，三审韩勇；撰稿：赵朔）
