取材→(2.5 %~3%)戊二醛前固定→(1%)四氧化锇后固定→漂洗→梯度脱水→临界点干燥→粘托→镀膜→扫描电镜观察。
注意事项:
1. 固定前清洗:清洗表面的灰尘、粘液等附着物,确保获得清洁的观察表面。可根据实验对象选择合适的清洗液,如蒸馏水、生理盐水、加酶清洗液等。
2. 如果拟观察试材剖面,切取材料的切刀应锋利,不能有锯痕或挤、拉、压伤。
3. 有些含水分多、幼嫩材料用冷冻断裂法取材效果更好,断裂面立体感强,成分和形态保存的好,无切痕,有条件时应采取冷冻法取材。
4. 采取花粉、孢子一类易分散的材料时,要注意防尘,避免样品飞散造成混杂。
5. 观察游离细胞等混在液体中的试材时,数量必须取够,避免后续处理时由于丢失造成材料不足而影响观察。
6. 每一步处理及操作过程中,应防止样品污染和损伤,使样品尽可能保持原有外貌和微细结构。
7. 在样品脱水及干燥处理时,尽可能减少样品收缩变形等人工损伤。
8. 在观察时,应注意确认和保护样品的观察面。
常规电镜样品要求:
必须是干燥的,不含任何水分或可挥发性物质;
具有一定的机械强度,能耐受电子束轰击;
具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。
(审核:一审张睿,二审何志全,三审韩勇;撰稿:赵朔)